調(diào)試好視頻測量顯微鏡才能得更精準(zhǔn)的數(shù)據(jù)

視頻測量顯微鏡被稱為“視頻"，因為它將傳統(tǒng)的顯微鏡與攝像系統(tǒng)、顯微鏡或計算機(jī)相結(jié)合，這使得顯微鏡的觀察結(jié)果能夠以數(shù)據(jù)的形式長期存儲。今天的顯微鏡非常強(qiáng)大。它的智能化、人性化和可擴(kuò)展性使視頻測量顯微鏡非常受歡迎。那么視頻測量顯微鏡應(yīng)該如何調(diào)試呢？讓我們來看看。

1、在正式試驗過程中，應(yīng)分別采用陽性對照和陰性對照控制試驗條件，并將試驗樣品一式兩份，以確保試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時背景較高，表明存在非特異性反應(yīng)，可以用羊血清、兔血清或BSA阻斷。

2.在ELISA中，各種實驗條件的選擇非常重要，包括：

①固體載體的選擇：許多物質(zhì)可用作固體載體，如PVC、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺和纖維素。形式可以是凹板、試管、珠等，目前常用的是40孔聚苯乙烯凹板。無論是哪種載體，都可以在使用前進(jìn)行篩選：用相同量的抗原包被，在相同的實驗條件下反應(yīng)，觀察其顏色反應(yīng)是否均勻，判斷其吸附性能是否良好。

②涂層抗體（或抗原）的選擇：當(dāng)抗體（或抗體）吸附在固體載體表面時，要求純度良好，PH值通常要求在9.0至9.6之間。吸附溫度、時間和蛋白質(zhì)含量也有一定影響，一般為4℃18-24小時。需要滴定蛋白質(zhì)涂層的適當(dāng)濃度：不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μG/ml等），在其他測試條件相同的情況下觀察陽性樣品的OD值。選擇OD值高、蛋白質(zhì)含量低的濃度。大多數(shù)蛋白質(zhì)通常為1～10μg/ml。

③酶標(biāo)抗體工作濃度的選擇：首先，用直接ELISA滴定初始滴度（見酶標(biāo)抗體部分）。然后固定其他條件或使用“方陣法"（涂層的不同稀釋度、待測樣品的參考物和酶標(biāo)記抗體）在正式實驗系統(tǒng)中準(zhǔn)確滴定其工作濃度。

④酶底物和供氫體的選擇：供氫體選擇的要求便宜、安全、顯色反應(yīng)明顯，但無色。一些氫供體（如OPD等）具有潛在的致癌作用，應(yīng)予以保護(hù)。合格者應(yīng)使用非致癌和敏感的氫供體，如TMB和ABTS，這些供體目前相對令人滿意。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿終止反應(yīng)。通常，基材作用時間為10-30分鐘。